293T細(xì)胞是一種常用的哺乳動物細(xì)胞系，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究、分子生物學(xué)和生物工程等領(lǐng)域。它是由人類胚胎腎細(xì)胞（HEK293）經(jīng)過轉(zhuǎn)染SV40大T抗原而來，具有高度的轉(zhuǎn)染效率和良好的細(xì)胞生長特性。
1. 細(xì)胞培養(yǎng)基選擇
293T細(xì)胞通常在高營養(yǎng)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，常用的培養(yǎng)基包括DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）或者高糖DMEM，通常添加10%的胎牛血清（FBS）或者去脂血清（FCS）。
2. 細(xì)胞培養(yǎng)溫度和CO2濃度
293T細(xì)胞通常在37°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)箱的CO2濃度一般設(shè)置為5%以維持細(xì)胞內(nèi)外的pH穩(wěn)定性。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)器皿選擇
293T細(xì)胞可以在培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶或者多孔板中培養(yǎng)。通常在25cm2或者75cm2的培養(yǎng)瓶中進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)。
4. 細(xì)胞傳代
當(dāng)293T細(xì)胞生長至80-90%的密度時，可以進(jìn)行傳代培養(yǎng)。傳代時，用PBS或無酶的細(xì)胞分離液洗滌細(xì)胞，用胰蛋白酶/EDTA消化細(xì)胞，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中繼續(xù)培養(yǎng)。
5. 抗生素的使用
為了保持培養(yǎng)物的純度，可以在培養(yǎng)基中添加適當(dāng)濃度的抗生素，如青霉素/鏈霉素或者青霉素/鏈霉素/抗真菌劑。
6. 細(xì)胞密度的控制
細(xì)胞密度的控制是細(xì)胞培養(yǎng)的重要環(huán)節(jié)之一。通常，細(xì)胞在培養(yǎng)皿中的密度不宜過高，以避免細(xì)胞間相互抑制和營養(yǎng)不足。一般來說，將細(xì)胞培養(yǎng)在70-80%的密度左右是比較理想的。
7. 培養(yǎng)基的更換
細(xì)胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基的成分會發(fā)生變化，建議每2-3天更換一次培養(yǎng)基，以保持細(xì)胞生長的良好狀態(tài)。
8. 無菌操作
在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，需要嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程，保持培養(yǎng)器皿、培養(yǎng)基和儀器的無菌狀態(tài)，以避免細(xì)胞培養(yǎng)物的污染。
9. 質(zhì)控檢測
在培養(yǎng)過程中，需要定期對細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)觀察和細(xì)胞數(shù)量計數(shù)，確保細(xì)胞的健康狀態(tài)和純度。
總的來說，良好的細(xì)胞培養(yǎng)條件對于293T細(xì)胞的生長和擴(kuò)增至關(guān)重要。嚴(yán)格控制培養(yǎng)條件，保持細(xì)胞的健康狀態(tài)，對于保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性具有重要意義。
